博落回Macleayacordata(Willd)R.Br.为罂粟科博落回属植物。博落回含有多种异喹啉类生物碱，包括原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱等活性成分[1]。博落回始载于《本草拾遗》，别号有号筒草、山大筒等，为多年生草本，在我国分布于安徽、江苏、湖北、湖南、四川等省区。博落回具有消肿、解毒、杀虫的功能，用于疔毒脓肿，恶疮溃疡，烫伤，顽癣等。现代药理研究表明博落回具有抗菌、抗肿瘤、杀虫杀蛆、止咳平喘、镇痛、改善肝功能、增强机体免疫力等作用[2]。已有文献报道采用HPLC法测定博落回果实中血根碱和白屈菜红碱的含量[3]。本实验采用HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量，为扩大以获得原阿片碱、别隐品碱为目的的博落回的中药材市场提供参考。
1实验材料
1.1仪器
SHIMADZU20A高效液相色谱仪，LC-solution工作站；TP300超声清洗仪(昆明市超声仪器有限公司)。
1.2试药
原阿片碱（中国药品生物制品鉴定所，批号110853-200402）；别隐品碱（SIGMA，批号S450987）。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。博落回样品采自湖南美可达生物资源有限公司种植园。
2方法与结果2.1色谱条件
色谱柱为Luna-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH3.5)-乙腈（78∶22）；流速：0.8mL/min；柱温：25℃；进样量：5μL；检测波长：284nm。
2.2对照品溶液的制备
精密称取原阿片碱对照品5.24mg，别隐品碱对照品8.62mg，置于同一50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备
取干燥的博落回不同部位样品1.00g，置于200mL圆底烧瓶中，加1%HCl水溶液-甲醇（1:1）200mL，称定质量，超声1h，放冷，再称定质量，用1%HCl水溶液-甲醇（1∶1）补足损失的质量，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4线性范围考察
精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0mL，分别置于10mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5μL进行分析。以对照品的浓度（μg/mL）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程。原阿片碱：Y=13790X－40090，r=0.9994，线性范围：4.2～52μg/mL；别隐品碱：Y=8306X－2800，r=0.9999，线性范围：6.9～86μg/mL。结果表明，原阿片碱、别隐品碱浓度与峰面积线性关系良好。
2.5精密度试验
取同一对照品溶液，重复进样6次，测定原阿片碱、别隐品碱峰面积，结果原阿片碱、别隐品碱峰面积的RSD分别为0.2%、0.3%。
2.6稳定性试验
取供试品溶液，自溶液配制后分别在0、2、4、8、12、24h各进10μL，测得原阿片碱、别隐品碱峰面积的RSD分别为0.9%、0.6%。结果表明该样品溶液在24h内稳定。
2.7重复性试验
取同一部位博落回药材（叶片，采集时间为2009年8月）粉末，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，进样测定原阿片碱、别隐品碱的含量平均值为1.04%、0.68%，RSD分别为0.9%、0.6%。2.8加样回收率试验
精密称取6份原阿片碱含量为1.04%、别隐品碱含量为0.68%的博落回叶片样品各0.5g，分别精密加入原阿片碱、别隐品碱对照品5.00mg和3.50mg。按“2.3”项下方法操作，在上述色谱条件下进行测定，计算原阿片碱回收率为99.2%，RSD为1.8%；别隐品碱回收率为99.4%，RSD为0.9%。
2.9样品测定
对不同部位的博落回样品按“2.3”项下制成供试品溶液，进行HPLC测定，记录原阿片碱、别隐品碱峰面积，按标准曲线法计算2个生物碱含量，每组重复测3次】。
通过对原阿片碱、别隐品碱对照品溶液在200～800nm波长扫描，结果显示原阿片碱、别隐品碱在284、288nm波长处有最大吸收，然后进一步分析比较这2个波长下的图谱，发现检测波长为284nm时，原阿片碱和别隐品碱都有较大吸收，且基线较为平稳，所以选择284nm为检测波长。
通过对比多种流动相，如甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液（pH3.5）流动相。结果表明，用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液（pH3.5）做流动相，基线稳定，分离度好，峰形对称，确定用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液（pH3.5）为流动相。本实验建立了同时测定博落回不同部位中原阿片碱、别隐品碱的定量检测方法，该方法简便、准确、灵敏度高。结果表明，博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱含量有差异；其中博落回叶片中原阿片碱含量最高，根中别隐品碱含量最高，两种生物碱之和在博落回不同部位中含量为：根＞果实＞叶＞茎。
