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女真子中黄酮类中药标准品物质的提取

时间:2017-09-22   浏览次数:  分享到:
女真为木犀科常绿灌木或小乔木,嫩枝有柔毛, 叶对生,革质,椭圆形。花期6~7月,果期8~12月。核果即女真子,椭圆形或长圆形,长6~12mm,幼时绿色,熟时蓝黑色。原产于日本,现我国一些地区,如华东,华南,西南及华中各地已大面积引种,作为园林绿化佳木。现代医学表明,女真子具有补腰膝,壮筋骨,强阴肾,乌须发,治神经衰弱,风热赤严眼等作用,是一种兼具营养和药理作用值得开发的植物资源(1)。黄酮类化合物广泛分布与植物界中,而且生理活性多种多样,在花,叶,果等组织中,一般多以甙的形式存在。医学研究表明,黄酮具有降低心肌耗氧量,使冠脉,脑血管流量增加,抗心律失常,软化血管,降血糖,降血脂,抗氧化,消除机体内自由基抗衰老作用,增加机体免疫力的功能(6)。从银杏(3) 等植物中提取黄酮类化合物,国内外已经有了很多报道,研究进展也很快。女真子中提取黄酮却鲜有报道。本文采用水浴方法对女真子中黄酮类化合物的提取工艺进行了研究。 
1 实验部分
1.1 主要仪器、试剂药品及材料
1.1.1 主要仪器
UV-1601型分光光度计及其配套设备(日产)AEL-160电子天平(日产)电热恒温水浴锅及冷凝回流装置(北京长安科学仪器厂)
SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)
1.1.2 材料与试剂
女真子:采自杭州,干燥粉碎后过40目筛;芦丁标准品(德思特生物);
无水乙醇、丙酮、甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠,以上均为分析纯
1.2 实验方法
1.2.1 芦丁标准应用液配制
准确称取干燥恒重的芦丁标准品0.0752g,用30%乙醇溶解并定容250mL,摇匀得浓度为0.3008mg/ml标准应用液。
1.2.2 工作曲线回归方程的建立
分别称取上述芦丁标准溶液1.0mL, 2.0mL,4.0mL,6.0mL,8.0mL于5只25ml容量瓶中,用30%乙醇补充至12.5mL,加入0.7mL5%亚硝酸钠摇匀,放置5min后加入0.7mL10%硝酸铝, 6min加入5ml1mol/L氢氧化钠, 混匀,用30%乙醇稀释至刻度,10min后于510nm处比色测定,试剂为空白参比.芦丁溶液C用最小二乘法进行线性回归,得芦丁溶液C与吸光度值A的关系曲线的回归方程式:C=105.318A+0.403γ=0.9999
1.2.3 实验步骤
1.2.3.1 正交设计
在参考文献2、3的基础上,通过预试,分别选定水浴的各个条件按正交表L9(34)安排四因素三水平
1.2.3.2 具体提取流程为使实验具有可比性,应将抽滤过程的方法步骤统
一, 流程如下: 干燥2.5g→浸泡17hr→水浴→冷却→抽滤→25ml浸提剂浸20min→抽滤→30ml浸提剂分三次洗滤→定容100ml
1.2.3.3 黄酮浓度测定
取浸提液0.5ml于25ml容量瓶,按上述1.2所用方法
测吸光度并计算黄酮含量。
2 结果与讨论
2.1 水浴最佳条件及其分析四种因
素对提取结果影响大小依次为A>B>C>D,即浸提剂>浸提剂浓度>水浴时间>水浴温度。浸提剂及其浓度的选择是主要因素,黄酮甙类以及极性稍大的甙元,如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等,易溶于甲醇、乙醇等极性较大的有机溶剂。本实验显示的最佳浸提剂是甲醇,说明女真子中可能含有较多的大极性甙元。浓度偏低的有机溶剂易于提取,这可能是由于女真子中有易溶于水的和易溶于醇的物质,易溶于水的部分主要是黄酮甙类及花色甙:而溶于甲醇的主要是黄酮甙元(或黄酮醇)类化合物,50%的甲醇水溶液对水溶性和醇溶性的黄酮化合物的提取都比较全面(2)。而水浴温度等影响不大,其最佳组合为A1B1D1C2。由于B因素最好为55%甲醇溶液,是否浓度越低越好呢?为此作者以浓度梯度再做扩展实验,结果发现50%甲醇溶液提取效果更佳。所以最终得出水浴最佳提取方法为以15倍原料重的50%甲醇溶液在65℃下浸提2小时。
小结
女真子中含有一定量的黄酮类化合物,在本实验所确定的最佳提取工艺条件下,即以15倍原料重的50%甲醇溶液宰65℃的水浴中浸提2小时,提取的黄酮含量为107.5mg/g。由此可见,女真子是一种很有发展前途的植物黄酮资源,具有很好的开发前景,而女真子中黄酮提取最佳条件的研究为其更好地开发利用提供了实验依据。
 

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